🧬 Objetivo: Compreender os principais métodos analíticos utilizados na bioquímica para identificação e quantificação de substâncias, especialmente proteínas e açúcares, e aplicar a construção de curvas de calibração em análises laboratoriais.

A espectrofotometria baseia-se na absorção de luz por moléculas em um determinado comprimento de onda. A intensidade da luz absorvida é proporcional à concentração da substância, conforme a Lei de Beer-Lambert:

onde:

Esse método é amplamente utilizado na determinação de proteínas (método de Biureto, Lowry ou Bradford) e açúcares redutores (método de DNS, por exemplo). Cada substância tem um comprimento de onda ótimo, o que permite análises precisas e não destrutivas.

A cromatografia separa os componentes de uma mistura com base em diferenças de afinidade entre a fase estacionária e a fase móvel.

Os compostos separados podem ser posteriormente analisados por espectrofotometria ou métodos enzimáticos para quantificação.

Os métodos enzimáticos utilizam enzimas específicas que reagem apenas com determinados substratos, permitindo análises seletivas. Exemplo:

Esses métodos são altamente sensíveis e amplamente utilizados em análises clínicas, como a determinação de glicemia e colesterol.

Uma curva de calibração é construída medindo-se a absorbância de soluções padrão de concentrações conhecidas. O gráfico resultante (absorbância × concentração) deve formar uma linha reta, indicando proporcionalidade direta.

Para determinar a concentração de uma amostra desconhecida: 1️⃣ Mede-se sua absorbância; 2️⃣ Localiza-se esse valor na curva; 3️⃣ Encontra-se a concentração correspondente no eixo X.

Esse processo é fundamental em bioquímica analítica, pois transforma dados experimentais em valores quantitativos confiáveis.

Os métodos espectrofotométricos, cromatográficos e enzimáticos são pilares da bioquímica analítica moderna. A combinação dessas técnicas possibilita identificar e quantificar compostos biológicos com precisão, favorecendo aplicações em pesquisa, diagnóstico clínico e controle de qualidade de alimentos e medicamentos.

1️⃣ A Lei de Beer-Lambert relaciona a absorbância de uma solução com:

a) A polaridade e a massa molar.

b) A temperatura e o tempo de reação.

c) O caminho óptico e a concentração da substância.

d) A tensão superficial e o ponto de fusão.

e) O volume e a densidade da amostra.

2️⃣ O método de Biureto é utilizado principalmente para determinação de:

a) Ácidos nucleicos.

b) Proteínas.

c) Lipídios.

d) Açúcares.

e) Sais minerais.

3️⃣ Na cromatografia, a separação das substâncias ocorre devido a diferenças em:

a) Densidade.

b) Temperatura de ebulição.

c) Afinidade entre fase móvel e fase estacionária.

d) Reatividade química com oxigênio.

e) Capacidade calorífica.

4️⃣ Um método enzimático de dosagem de glicose utiliza a enzima:

a) Amilase.

b) Glicose oxidase.

c) Catalase.

d) Lactase.

e) Urease.

5️⃣ A curva de calibração é usada para:

a) Verificar a pureza de uma amostra.

b) Identificar a cor de uma substância.

c) Determinar a concentração de uma substância desconhecida.

d) Medir a temperatura de reação.

e) Controlar o pH de uma solução.

6️⃣ A principal vantagem dos métodos enzimáticos é:

a) Baixa especificidade e baixo custo.

b) Alta seletividade e sensibilidade.

c) Menor necessidade de reagentes.

d) Aplicação restrita a compostos orgânicos simples.

e) Facilidade de execução sem controle de temperatura.